.. Prinsip Teknologi PCR
Tahun ini, COVID-19 ini mengamuk di seluruh dunia, dan semua orang harus mendengar pengujian asam kreat. Dalam deteksi asam akupuntur dari epidemi, teknologi fluoresensi PCR memainkan peran pusat, yang dapat membantu inspeksi dengan cepat dan akurat menentukan apakah mereka terinfeksi dengan COVID-19.
Jadi, apa yang sebenarnya adalah Teknologi PCR?
PCR adalah singkatan dari reaksi rantai polimerase. Singkatnya, PCR terdiri dari tiga langkah reaksi dasar: denaturan-suhu rendah annealing-ekstensi suhu medium:
1. Denaturasi DNA menjadi single-stranded
Setelah DNA templat dipanaskan hingga sekitar 95 °C untuk periode waktu tertentu, untai ganda dari DNA templat tersebut terputus menjadi satu untai sehingga dapat mentautkannya ke primer dan mempersiapkan reaksi pada ronde berikutnya.
2. annealing suhu rendah
Setelah DNA templat didenaikan menjadi helai tunggal, suhu menurunkan menjadi sekitar 55 °C, dan primer dipasangkan dengan urutan pelengkap dari templat DNA helai tunggal.
3. Ekstensi suhu sedang
Di bawah aksi enzim Taq, templat DNA dan konjugasi primer menggunakan dNTP sebagai reaksi bahan mentah dan urutan target sebagai templat, menurut prinsip pemasangan dasar dan replikasi semi-reservasi, dan akhirnya synthesize rangkaian replikasi semi reservasi baru untuk rantai DNA templat.
Ⅱ. Metode deteksi PCR neon
Saat ini, sebagian besar reagen deteksi COVID-19 yang disetujui oleh Administrasi obat negara Tiongkok menggunakan metode PCR neon untuk mendeteksi COVID-19.
Metode PCR neon mengacu pada menambahkan kelompok neon ke sistem reaksi PCR. Dengan progres amplifikasi PCR, produk reaksi terus terkumpul, dan intensitas sinyal fluoresensi juga meningkatkan secara proporsional. Grafik kurva amplifikasi fluoresensi, deteksi waktu nyata dari proses fluoresensi PCR.
.. Prinsip pemilihan PCR neon habis pakai
1. Bahan
PCR umumnya terbuat dari bahan PP, karena bahan habis pakai PCR/qPCR biasanya berhubungan langsung dengan reagen atau sampel, sementara bahan Polipropilena (PP) adalah bahan inkron, permukaan tidak mudah mematuhi biomolekules, dan memiliki ketahanan kimia dan suhu yang baik. Toleransi (dapat diautoclave pada 121 °C dan juga dapat menahan perubahan suhu selama bersepeda termal). Bahan habis pakai PCR adalah semua bahan PP.
2. Tabung PCR/volume pelat
Bagaimana memilih tabung PCR/piring volume yang berbeda?
Tujuan pilihan: pilih produk yang sesuai sesuai dengan persyaratan eksperimental tertentu. Volume tabung PCR sebagian besar dapat memenuhi persyaratan reaksi PCR. Tabung PCR sangat ideal untuk throughput PCR/qPCR Rendah hingga menengah eksperimen, dengan tabung tunggal dan strip yang menjadi dua format yang paling umum digunakan.
Sebuah tabung tunggal memberikan fleksibilitas untuk mengatur jumlah pasti reaksi untuk berjalan. Sebagai alternatif, satu tabung 0.5mL dapat dipilih untuk volume reaksi yang lebih besar.
Kopling biasanya tersedia dalam 8 atau 12 tabung dengan format terpisah atau dengan tutup. Kompatibel dengan pipet tunggal dan multi saluran untuk eksperimen throughput rendah dan menengah. Strip dengan tutup terbuka dan tutup tabung sampel secara independen untuk mencegah kontaminasi sampel.
3. Ketebalan dinding
Ketebalan dinding tabung secara langsung mempengaruhi konduktivitas termal, dan ketebalan dinding yang sangat tipis mengoptimalkan penghantar panas dan mengurangi waktu siklus. Plastik dinding ultra-tipis sekitar 50% lebih tipis dari versi standar, selanjutnya mengurangi penghalang termal, menghasilkan respons yang lebih cepat dan lebih kuat. Bahan habis pakai PCR adalah semua tabung dinding ultra-tipis.
4. Warna
Pelat PCR sering tersedia dalam berbagai format warna yang berbeda untuk memfasilitasi distilasi visual dan identifikasi sampel, terutama dalam percobaan throughput tinggi. Untuk reaksi PCR biasa, memungkinkan untuk menggunakan tabung PCR transparan atau berwarna, dan tabung PCR transparan lebih membantu untuk manajemen klasifikasi sampel.
Meskipun warna plastik tidak berpengaruh pada amplifikasi DNA, PCR putih berkualitas tinggi tidak dapat dikonsumsi untuk qPCR. Karena qPCR membutuhkan deteksi kuantitatif real-time dari intensitas sinyal fluoresensi, transmisi sinyal fluoresensi sensitif dan akurat diperlukan. Eksperimen telah menunjukkan bahwa, dibandingkan dengan Produk PCR transparan tradisional, Produk PCR putih dapat mencerminkan sinyal neon ke tingkat terbesar, mengurangi kontaminasi silang sinyal ruang, dan mendapatkan hasil real-time fluoresensi kuantitatif PCR.
Merek instrumen yang berbeda, karena desain posisi yang berbeda dari detektor fluoresensi, silakan lihat bahan yang direkomendasikan oleh produsen. Untuk instrumen bio-rad CFX atau Roche 480 real-time PCR, Produsen merekomendasikan untuk menggunakan piring PCR putih. Karena pelat PCR baik putih atau transparan, dan memiliki berbagai spesifikasi, sangat cocok untuk instrumen PCR umum di pasaran.
Email kami: